Современная электронная библиотека ModernLib.Net

Физиология размножения и репродуктивная патология собак

ModernLib.Net / Биология / Дюльгер Георгий / Физиология размножения и репродуктивная патология собак - Чтение (стр. 3)
Автор: Дюльгер Георгий
Жанр: Биология

 

 


Глава 2. БИОТЕХНИКА РАЗМНОЖЕНИЯ

2.1. ЕСТЕСТВЕННОЕ ОСЕМЕНЕНИЕ

       Вольное спаривание — естественный способ размножения собак. У самок могут быть моно- и полигамные половые акты. При моногамном спаривании собаки совершают по одному-два коитуса ежедневно с одним самцом на протяжении всей половой охоты. Оплодотворяемость очень высокая. Полигамная вязка часто приводит к рождению потомства от разных самцов. Вольное спаривание способствует бесконтрольному размножению городской и сельской популяции бездомных собак, широкому распространению заболеваний, передаваемых половым путем (бруцеллез, трансмиссивная венерическая опухоль и др.), и в целом непригодно для разведения племенных животных.
       Ручное спаривание — основной способ племенного разведения собак. Родительские пары подбирают по генеалогическим, экстерьерным и другим признакам.
      К спариванию допускают только здоровых животных. Обследованию самок предшествует тщательный сбор сведений об их происхождении, темпераменте, условиях кормления и содержания, о ранее перенесенных заболеваниях, травмах, операциях, сроках проведения вакцинации и дегельминтизации, особенностях и длительности пустовки (проэструс+эструс), межэстрального периода, наличии и результативности плановых и случайных вязок, продолжительности и особенностях беременности, родов, послеродового периода, лактации, численности и сохранности приплода, причинах его гибели и т. д.
      При клиническом осмотре оценивают общее состояние организма самки, его отдельных органов и систем. Тщательно исследуют молочные железы, наружные половые органы, органы брюшной и тазовой полостей для выявления аномалий их развития, новообразований и воспалительных процессов. При наличии показаний используют лабораторные и инструментальные методы исследования.
      Собирают также сведения о происхождении, характере, темпераменте и половой активности самца, перенесенных им операциях, травмах и заболеваниях, сроках проведения вакцинации и дегельминтизации, характере кормления, условиях содержания, режиме эксплуатации, числе вязок и их результативности, сохранности приплода и т. д.
      При клиническом осмотре самцов особое внимание обращают на мошонку, семенники, их придатки, головку полового члена, предстательную железу: оценивают состояние этих органов, выявляют аномалии развития, новообразования и воспалительные процессы. Важно тщательно обследовать ротовую полость, поскольку самец при облизывании половых органов самки способен занести в них инфекцию. У самцов-производителей исследуют сперму и при необходимости прибегают к дополнительным лабораторным и инструментальным методам исследования.
      Племенных животных обеспечивают полноценным кормлением и активным моционом, приучают к поводку и наморднику. Обязательное условие — ежегодная профилактическая дегельминтизация и вакцинация против чумы плотоядных, аденовирусного гепатита, парвовирусного энтерита, лептоспироза и бешенства, а также против микроспории и трихофитии.
      Самцов рекомендуют допускать к вязке в возрасте 2…8 лет, самок — 1,5…8 лет. Оптимальный возраст для первой вязки самок — не позднее 2,5…3 лет. Режим использования самок — не более одного помета в год.
      За молодым физиологически зрелым самцом-производителем в первый год репродуктивной жизни закрепляют 3…4 самки (6…8 вязок), а за взрослым в возрасте 3…8 лет целесообразно закреплять 10…15 самок (20…30 вязок), максимально 20 (Карпов В. Я., 1990). По другим данным (Roberts S. J., 1971), молодых самцов можно использовать в режиме 1…2 вязки в неделю, или 30…40 самок в год, полновозрастных — 2…6 вязок в неделю, или 30…80 самок в год.
      Для спаривания собак (под контролем инструктора по вязке и владельцев) необходима тихая спокойная обстановка в помещении или на улице. Самок лучше приводить к самцам. В привычной обстановке самцы ведут себя более активно. Обоих животных утром не кормят, долго выгуливают на поводках для стимуляции взаимного полового влечения. Агрессивным животным надевают намордник. Самка в охоте обычно не препятствует самцу совершать садки и допускает коитус. При необходимости владелец удерживает самку за ошейник и под живот, а инструктор по вязке помогает самцу ввести половой член в ее влагалище. Собак удерживают за поводки или ошейники до окончания коитуса (полового замка), чтобы они не рвались друг от друга и не травмировали свои половые органы.
      При ручном спаривании важно правильно выбрать время и кратность осеменения. Сроки овуляции собак — 2…5-й день половой охоты (с колебаниями за 2 дня до и спустя 7 дней после ее начала). Яйцеклетка созревает только через несколько дней после овуляции. Спермии сохраняют способность к оплодотворению в половых органах на протяжении 5…6 дней (Doak R.L. et al., 1967). Теоретически преовуляционный период и 2 дня после овуляции — оптимальный срок для плодотворного осеменения.
      В кинологической практике время осеменения устанавливают по дню начала течки или половой охоты и по картине влагалищных мазков. Самок обычно вяжут на 10…14-й день после начала течки (пустовки) или на 2…3-й день половой охоты. Об оптимальном сроке осеменения судят по картине влагалищных мазков — высокому индексу ороговения эпителиальных клеток (80%) и их ацидофилии (60%).
      Через 1…2 дня целесообразно повторить вязку (контрольная вязка). Двукратное спаривание собак повышает эффективность вязки на 26… 36% по сравнению с эффективностью однократного спаривания.
      На эффективность спаривания существенное влияние оказывает продолжительность половой охоты: чем продолжительнее этот период, тем ниже результативность двукратной вязки собак, проведенной в первые 4 дня эструса.

2.2. ИСКУССТВЕННОЕ ОСЕМЕНЕНИЕ

      Метод искусственного осеменения собак известен с XVIII в.: как физиологический опыт его впервые применили итальянские ученые Спаланцани (1780 г.) и Росси (1782 г.). В настоящее время искусственное осеменение собак практикуют во многих странах мира. Ограничения по его использованию существуют только в Великобритании. Британский клуб собаководов (The British Kennel Club) обычно не регистрирует в племенную книгу потомство, полученное посредством искусственного осеменения.
      С помощью метода искусственного осеменения можно более эффективно подбирать пары для получения потомства, предупреждать распространение инфекционных заболеваний, передаваемых половым путем, рационально использовать ценных в племенном отношении самцов-производителей. Благодаря современной технологии хранения спермы вне организма сперму транспортируют на любые расстояния, осеменяют самок в наиболее благоприятное для оплодотворения время, что облегчает разведение собак редких пород. Риск распространения наследственных пороков при использовании данного метода разведения не превышает риска передачи патологий при естественном осеменении. К сожалению, искусственное осеменение — более дорогой и менее распространенный способ разведения племенных собак, чем ручное спаривание. Для использования этого метода нужны высококвалифицированные специалисты, специальное оборудование, инструменты и материалы.
      Технология искусственного осеменения собак состоит из следующих этапов: получение спермы, оценка качества эякулята, его разбавление и хранение вне организма, определение времени осеменения самки и введение в ее половые органы спермы.
       Способы получения спермы.Сперму от самцов-производителей получают посредством мастурбации или же с помощью искусственной вагины.
       Мастурбация — основной способ получения от самцов спермы хорошего качества. Технически данный способ несложен. У самцов быстро вырабатывается рефлекс на мастурбацию. Первые несколько раз сперму лучше брать в присутствии самки в охоте. Самцу позволяют ее обнюхать, совершить несколько садок, не допуская коитуса. Затем через препуциальный мешок рукой массируют половой член. При появлении признаков эрекции препуциальный мешок отводят назад и выводят наружу краниальную часть полового члена. Половой член сверху и позади его луковицы обхватывают большим и указательным пальцами правой руки и ритмично сжимают. Этот прием приводит к полной эрекции пениса и эякуляции. Сперма выделяется в виде трех четко разделенных фракций.
      Первая фракция эякулята, как правило, не содержит спермиев и представляет собой прозрачный бесцветный жидкий секрет, выполняющий роль смазки.
      Вторая фракция мутно-белого цвета, состоит из спермиев и незначительного количества жидкого секрета. При ее выделении самцы обычно совершают ритмичные толкательные движения тазом.
      Третья фракция эякулята бесцветная и прозрачная, представляет собой секрет предстательной железы и, как правило, не содержит спермиев. При выделении этой фракции спермы половой член поворачивают на 180° и отводят назад для имитации полового «замка».
      Сперму получают в широкогорлый спермоприемник или стаканчик, подставленный к головке пениса. Необходимо соблюдать осторожность при получении второй фракции спермы, поскольку при ее выделении самцы обычно совершают резкие совокупительные движения тазом. Для искусственного осеменения используют вторую и часть третьей фракции эякулята. Некоторые исследователи рекомендуют получать отдельно третью фракцию эякулята и использовать ее в качестве разбавителя при осеменении замороженно-оттаянной спермой.
       Искусственная вагина — специальный прибор, имитирующий влагалище самки. Разработано несколько конструкций искусственных вагин для получения спермы от собак.
      Наиболее распространенная из них модель, предложенная А.Е. Наггор (1954), состоит из наружного упругого резинового цилиндра размером 15х5 см и внутренней эластичной резиновой трубки, закрепленной на обоих концах цилиндра. Между цилиндром и резиновой трубкой образуется замкнутая резиновая камера, соединенная через патрубок с резиновой грушей, предназначенной для нагнетания воздуха в камеру и создания пульсирующего давления в вагине. На середине цилиндра расположен второй патрубок с краником, через который заливают горячую воду, чтобы создать в вагине оптимальную температуру (41…42 °C). Спермо-приемником служит градуированная пробирка. Все части искусственной вагины, соприкасающиеся со спермой, должны быть чистыми, сухими, стерильными и теплыми, а ее входная часть смазана стерильным вазелином, чтобы обеспечить оптимальную фрикцию (трение). Первые несколько раз сперму берут в присутствии самки в охоте. У самцов методом массажа стимулируют эрекцию пениса. При появлении признаков эрекции половой член выводят из препуциального мешка и направляют в искусственную вагину. В искусственной вагине создается пульсирующее давление, способствующее наступлению эякуляции. После прекращения совокупительных движений половой член вместе с вагиной поворачивают на 180° и отводят назад до окончания эякуляции.
      Более простую и эффективную модель искусственной вагины для получения спермы от собак предложил S.W. Seager (1977): она состоит из одностенной конусовидной резиновой трубки и пластмассовой градуированной центрифужной пробирки объемом 15 мл. После выведения пениса из препуция на него надевают искусственную вагину и приступают к мастурбации. Дигитальный массаж основания полового члена приводит к полной эрекции пениса и выделению спермы.
      Указанными способами можно получать эякуляты, как разделенные, так и не разделенные на фракции.
       Основные показатели спермы собак.Объем целого эякулята и отдельных его фракций может сильно варьировать и зависит от многих факторов: размера, возраста, состояния здоровья и индивидуальной потенции самца-производителя, а также режима его полового использования, способа получения спермы. При получении спермы посредством мастурбации объем неразделенного на фракции эякулята у самцов массой менее 20 кг составляет в среднем 5,4 мл, у самцов массой более 20 кг — 12,5 мл. Сведения о продолжительности эякуляции и объеме отдельных фракций спермы при разных способах ее получения приведены в таблице 5.

5. Продолжительность эякуляции и объем отдельных фракций спермы в зависимости от способа получения эякулята (Christiansen Ib. I., 1984)

      Сперма состоит из двух компонентов: плазмы спермы и спермиев. Плазма спермы представляет собой смесь секретов семенников, их придатков, ампул спермиопроводов и предстательной железы. Предстательная железа — основной продуцент плазмы спермы. Химический ее состав сложен (табл. 6).

6. Химический состав плазмы спермы собак (White L. G., 1980)

      Плазма спермы собак содержит мало энергетических материалов (фруктозы, сорбита), лимонной и аскорбиновой кислот. Основной катион плазмы спермы — натрий, анион — хлор. Плазма характеризуется высокой электропроводностью и низкой буферной емкостью (поэтому не способна эффективно противостоять неблагоприятным воздействиям на спермии многих внешних факторов).
      Спермии — главный компонент спермы — вырабатываются в извитых канальцах семенников. Тестикулярные спермии представляют собой незрелые мужские половые клетки, которые созревают и хранятся в канале придатка семенника. Зрелые спермии практически лишены цитоплазмы, незрелые содержат проксимальную или дистальную цитоплазматическую каплю.
      Зрелые спермии состоят из головки, шейки, тела и хвоста (рис. 12). Головка спермия ложкообразная: спереди имеет форму овала, сбоку — узкой полоски, вогнутой с одной стороны и выпуклой с другой. Длина головки достигает 6,1?10 -3мм, ширина — 3,8?10 -3мм, толщина — примерно 1?10 -3мм. Общая длина спермия составляет 6,14?10 -2мм (Mahi-Brown С. А., 1991).
       Рис. 12. Схематическое изображение спермия собаки:
       1 — головка; 2 — шейка; 3 — тело; 4 — хвост
 
      Оплодотворение яйцеклетки — основная функция спермия, выполнение которой обеспечивается за счет способности сперми-ев активно двигаться, генерировать энергию и проникать через оболочки ооцита. Оплодотворяющей способностью характеризуется головка спермия. Большую часть головки занимает ядро, окруженное непроницаемой ядерной оболочкой. Хроматин ядра плотно упакован и состоит из дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) и специфических ядерных белков — гистонов. Снаружи головка покрыта цитоплазматической оболочкой (плазмолеммой), которая переходит на шейку, тело и хвост спермия. В апикальной части головки спермия между плазмолеммой и ядерной оболочкой располагается акросома, состоящая из внутренней и внешней мембран и содержимого, богатого ферментами. Акросомные энзимы необходимы для рассеивания клеток яйценосного бугорка и проникновения головки спермия в яйцеклетку. Ферменты из ак-росомы высвобождаются после дозревания спермиев в нижней трети маточных труб в результате так называемой акросомной реакции — разрушения наружной оболочки акросомы.
      Шейка соединяет головку с телом. Ее цитоплазма содержит две центриоли — проксимальную, которая при оплодотворении вносится в цитоплазму яйцеклетки, и дистальную, которая подразделяется на две части: переднюю и заднюю. От передней части дис-тальной центриоли начинается осевая нить — двигательный аппарат спермия, представляющий собой микротрубочки, содержащие сократительный белок тубулин. Осевая нить состоит из 11 фибрилл, 2 из которых центральные, 9 боковые. Боковые фибриллы, сформированные из тонких внутренних и толстых наружных нитей, образуют фибриллярный футляр. Осевая нить пронизывает тело и хвост спермия и по строению сходна с ресничками мерцательного эпителия. Энергию, необходимую для движения спермия, генерируют митохондрии, образующие двойную спиралевидную оболочку вокруг осевой нити тела. Замыкающее кольцо этой оболочки (кольцо Иенсена) представляет собой заднюю часть дистальной центриоли.
      Хвост — орган движения спермия. Его осевая нить окружена тройной спиральной нитью. Концевая часть хвоста лишена плаз-молеммы, из-за расслоения 11 тонких фибрилл по виду напоминает кисточку.
      Источником энергии для спермиев служит аденозинтрифос-форная кислота (АТФ). Эндогенные запасы АТФ у спермия быстро расходуются при движении и поэтому должны постоянно восполняться за счет гликолиза (фруктолиза) моносахаров и биологического окисления различных веществ. При гликолизе образуются две молекулы молочной кислоты и выделяется энергия: С 6Н 12O 6—> 2СзН 6О 3+ 2АТФ. Химически процесс окисления глюкозы (фруктозы) выражается следующей формулой: С 6Н 12O 6+ 60 2—> 6СO 2+ 6Н 2О + 38АТФ. В качестве энергетических материалов спермии могут использовать фруктозу и сорбит плазмы спермы, собственные структурные жиры и белки, а в половых путях самки и в искусственных средах — фруктозу, глюкозу, маннозу и некоторые другие соединения. Конечные продукты окисления жиров — диоксид углерода и вода. При окислении белков могут образовываться токсичные для спермиев вещества: аммиак, пе-роксид водорода.
      Различают три вида движения спермиев: прямолинейно-поступательное, колебательное и манежное. Нормальные спермии двигаются прямолинейно-поступательно за счет волнообразных сокращений хвоста и вращения спермия вокруг своей оси. При недостаточном количестве энергии спермии совершают только колебательное движение, при деформированной головке — двигаются по кругу: как бы гоняются за своим хвостом. Спермии способны к ориентированному движению: против тока жидкости (реотаксис) и по направлению к химическим раздражителям (хемотаксис). При движении они не сталкиваются и не склеиваются друг с другом благодаря поверхностному отрицательному электрическому заряду.
       Влияние факторов внешней среды на активность и жизнеспособность спермиев. При работе со спермой вне организма необходимо четко представлять характер воздействия факторов внешней среды на активность и жизнеспособность спермиев и умело использовать эти знания на практике.
      Температура. При нормальной температуре тела животного спермии проявляют высокую метаболическую и двигательную активность, но быстро погибают вследствие истощения энергетических запасов и накопления в плазме спермы продуктов обмена (молочной кислоты и др.). Повышение температуры опасно для спермиев. При температуре 46 °C и выше начинается коагуляция (свертывание) белков плазмы. Охлаждение спермы улучшает ее сохранность. При температуре 15 °C спермии становятся малоактивными и способны совершать только колебательные движения. При температуре 2…5 °C они впадают в состояние анабиоза. При нагревании охлажденной спермы до нормальной температуры тела животного их активность восстанавливается. Однако следует отметить, что резкое охлаждение спермы вызывает температурный (холодовый) шок — гибель и повреждение спермиев. При разбавлении спермы молочным разбавителем или специальными протекторными (защитными) искусственными средами, содержащими свежий желток куриного яйца, и при медленном охлаждении спермии не погибают от температурного шока. В естественной среде — плазме спермы — спермии не переносят замораживания. При разбавлении спермы криопротек-торной искусственной средой, содержащей глицерин, и соблюдении технологии замораживания большинство спермиев после размораживания сохраняет свою активность и оплодотворяющую способность. Срок хранения замороженной спермы исчисляется десятилетиями.
       Свет. Прямой солнечный свет вреден для спермиев. Под его воздействием в плазме спермы в результате фотохимических реакций образуется токсичное для спермиев вещество — пероксид водорода. В отличие от крови плазма спермы не содержит перокси-дазы — фермента, разрушающего пероксид водорода.
       Реакция, или рН, среды. Концентрация ионов водорода оказывает большое влияние на подвижность и жизнеспособность спермиев. Слабокислая среда подавляет обменные процессы в спермиях, слабощелочная, наоборот, активизирует обмен веществ в половых клетках. В слабокислой среде спермии впадают в состояние анабиоза уже при комнатной температуре. Нейтрализация кислоты, а также повышение температуры выводят спермии из анабиотического состояния, и они возобновляют движение. Сильные кислоты и щелочи даже в незначительных концентрациях вызывают гибель спермиев.
       Осмотическое давление. Спермии очень чувствительны к изменениям осмотического давления среды, в которой они находятся. Осмотическое давление создается растворенными в воде веществами и зависит от их концентрации. Растворы, осмотическое давление которых такое же, как у спермы, называют изотоническими, меньшее — гипотоническими, большее — гипертоническими. Гипо- и гипертонические среды вызывают гибель спермиев. В гипотонических растворах спермии погибают от набухания, в гипертонических — от обезвоживания. Спермии хорошо сохраняют свою жизнеспособность в изотонических растворах многих солей и сахаров: 0,9%-м растворе хлорида натрия, 2,9%-м цитрата натрия, 1%-м бикарбоната натрия, 6%-м глюкозы и др.
       Препараты, используемые при искусственном осеменении. По безвредности их подразделяют на абсолютно безвредные (глюкоза, цитрат натрия и др.), безвредные (лактоза и др.), относительно безвредные (хлорид натрия, бикарбонат натрия и Др.), условно безвредные (трис-буфер, глицерин, антибиотики и др.) и вредные (спирт, пероксид водорода и др.). В практике искусственного осеменения используют вещества, относящиеся к первым четырем группам. Абсолютно безвредные, безвредные и относительно безвредные препараты можно использовать в изотонических концентрациях, условно безвредные вводят в состав сложных искусственных сред в небольших количествах, чтобы повысить устойчивость спермиев к действию различных внешних факторов — замораживанию, контаминации микроорганизмами и др.
       Оценка эякулята. Сперму получают только от здоровых, физиологически зрелых самцов в манеже с соблюдением ветеринарно-санитарных правил и не более 3 раз в неделю. При таком режиме можно получать до 2 млрд спермиев в неделю. Более интенсивное использование самцов-производителей приводит к их половому истощению и ухудшает качество получаемой спермы. Для хранения спермы в замороженном состоянии от собак обычно получают 2 эякулята с перерывом в 1…2 ч (в неделю).
      Качество спермы оценивают сразу же после ее получения. Сперму исследуют макро- и микроскопически. При макроскопическом исследовании определяют ее объем, цвет, запах и консистенцию; при микроскопическом — активность спермиев, их концентрацию, процентное соотношение нормальных и патологических форм.
      В норме сперма собак консистенции и цвета обезжиренного молока, без запаха. Сперму с неприятным запахом, загрязненную кровью (гемоспермия), мочой (уриноспермия), гноем (пиоспермия) выбраковывают. При выделении такой спермы самца-производителя тщательно обследуют, назначают соответствующее лечение и не допускают к использованию до полного выздоровления.
       Активность спермиев определяют под микроскопом при температуре 38…39 °С, используя специальный обогревательный столик. На чистое предметное стекло наносят каплю спермы и накрывают покровным стеклом. Раздавленную каплю исследуют под микроскопом в неярком свете при увеличении 200…300 раз. Сперму оценивают визуально по десятибалльной шкале, определяя количество спермиев с прямолинейно-поступательным движением. Высшую оценку 10 баллов получает сперма, в которой практически все спермии двигаются прямолинейно-поступательно. При оценке 9 баллов примерно 90% спермиев двигаются прямолинейно-поступательно, при оценке 5 баллов — 50% и т. д. Сперму, не содержащую спермиев, обозначают буквой А (аспермия), с мертвыми спермиями — буквой Н (некроспермия). Нормальная активность спермиев собаки составляет 7…10 баллов.
       Концентрация спермы — показатель, который определяют при помощи счетной камеры Горяева, используемой для подсчета эритроцитов и лейкоцитов (наиболее простой и достаточно надежный способ), а также при помощи фотоэлектрического колориметра или автоматического счетчика клеток. Камера Горяева состоит из толстого предметного стекла, разделенного поперечными прорезями на три площадки. Средняя площадка ниже боковых на 1/10 мм и разделена продольной прорезью на две части, на каждой из которых выгравирована сетка. Каждая сетка состоит из 225 больших квадратов, из них 25 разделено на 16 маленьких квадратиков. Площадь маленького квадратика составляет 1/400 мм 2. Если площадку накрыть шлифованным стеклом, то объем камеры маленького квадратика составит 1/400 мм 3.
      Для подсчета спермиев пробу спермы предварительно разбавляют 3%-м раствором хлорида натрия. В гипертоническом растворе хлорида натрия спермии становятся неподвижными (погибают), что облегчает подсчет. Сперму разбавляют в 100 раз при помощи эритроцитарного меланжера. Для этого в меланжер вначале набирают сперму до отметки 1, затем раствор хлорида натрия до отметки 101. Чтобы равномерно смешать сперму с раствором, концы меланжера зажимают между большим и указательным пальцами и встряхивают в течение 2…3 мин. Из пипетки меланжера удаляют первые 4 капли, не содержащие спермиев. Следующую каплю вносят под заранее притертое шлифованное стекло. Заряженную камеру Горяева кладут на столик микроскопа и исследуют под большим увеличением. Спермии подсчитывают в пяти больших квадратах (80 малых) по диагонали. Считают только головки спермиев, расположенные внутри малых квадратиков, а также на их левых и верхних линиях. Число спермиев, подсчитанных в пяти больших квадратах, суммируют и делят на 200. При делении получается цифра, выражающая содержание спермиев (млрд в мл).
      Концентрация спермы собак может сильно варьировать — от 25 млн до 400 млн клеток в 1 мл. По этой причине качество спермы оценивают не по ее концентрации, а по числу активных спермиев в эякуляте.
      Ценным показателем служит процентное соотношение нормальных и патологических форм спермиев . Чтобы определить их соотношения, наносят на край обезжиренного, сухого, чистого и теплого предметного стекла 1 каплю спермы и 2…3 капли 0,9%-го раствора хлорида натрия. Капли быстро перемешивают стеклянной палочкой и делают при помощи шлифованного стекла тонкий мазок. Мазок высушивают, фиксируют несколько минут 96%-м спиртом и окрашивают не менее 5 мин 1…2%-м раствором эозина. Раствор краски готовят на 2,9%-м растворе цитрата натрия. Краску на стекле смывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Просохший мазок просматривают под микроскопом при увеличении в 400…600 раз и подсчитывают в нескольких полях зрения не менее 200 спермиев. Число нормальных и патологических форм спермиев по каждому полю зрения суммируют и определяют их процентное соотношение.
      К патологическим формам спермиев относят: гигантские, карликовые, с деформацией головки, с двумя головками, с надломом шейки и ее эксцентричным креплением к головке, изолированные головки, с искривленным и закрученным хвостом, с двумя хвостами, с цитоплазматической каплей и т. д.
      В нормальной сперме собак удельный вес патологических форм спермиев не должен превышать 30%.
       Хранение спермы. Собак осеменяют свежеполученной, охлажденной (сохраняемой при температуре 2…5 °C) и замороженно-оттаянной спермой.
      Свежеполученную сперму используют сразу же после оценки ее качества. К использованию допускают эякуляты, содержащие не менее 60 млн активных спермиев. Наилучшие результаты получают при содержании в спермодозе не менее 200 млн активных спермиев.
       Охлаждение — наиболее отработанный способ хранения спермы вне организма. Для разбавления и кратковременного хранения спермы собаки обычно используют молочную и цитратно-желточную среды.
       Молочная среда. Свежее цельное или лучше обезжиренное коровье молоко — 100 мл, пенициллин и (или) стрептомицин — 0,05…0,1 г.
      Молоко берут от клинически здоровых коров с отрицательными результатами исследований на туберкулез, лептоспироз, бруцеллез, а также мастит. Желательно подобрать коров, продуцирующих молоко низкой жирности, поскольку молочные жировые шарики значительно затрудняют оценку качества разбавленной спермы. Молоко обязательно прогревают на водяной бане в течение 10 мин при температуре 92…96 °C для разрушения некоторых его белков, оказывающих на спермии токсическое действие. Затем молоко процеживают через 3…4 слоя стерильной марли, охлаждают до температуры 35…39 °C и добавляют антибактериальный препарат.
       Цитратно-желточная среда. Цитрат натрия трех-замещенный пятиводный — 2,32 г, свежий желток куриного яйца — 20 мл, пенициллин и (или) стрептомицин — 0,05…0,1 г, вода дистиллированная (бидистиллированная) — 80 мл.
      Навеску цитрата натрия вносят в чистую стерильную колбу. Вливают в колбу прокипяченную и остуженную дистиллированную воду; фильтруют, добавляют антисептик и желток куриного яйца. Перед извлечением желтка скорлупу яйца обеззараживают при помощи бактерицидной лампы или спиртового ватного тампона.
      Среды готовят непосредственно перед получением спермы. Последнюю разбавляют сразу же после оценки ее качества. Температура спермы и среды должна быть одинаковой, чтобы предупредить температурный шок спермиев. Разбавляют сперму в градуированном смесителе, при этом среду добавляют небольшими порциями. После добавления каждой порции смеситель вращают, чтобы равномерно смешать среду и сперму. Разбавленную сперму медленно охлаждают и хранят при температуре 2…5 °C до 4…5 сут. В 1-е сутки хранения оплодотворяющая способность охлажденной спермы соответствует свежеполученной, на 4-е сутки она лучше, чем замороженно-оттаянной.
       Криоконсервация , или замораживание, — самый перспективный способ хранения спермы вне организма. Впервые собаку успешно осеменили замороженно-оттаянной спермой в 1969 г. в США.
      Методические основы замораживания и хранения спермы собаки и быка одинаковы. Сперму разбавляют в 4…9 раз криопротекторной средой (до концентрации не менее 40…80 млн активных спермиев в 1 мл). В качестве криопротекторной среды обычно используют трис-буферный разбавитель, содержащий 20% желтка куриного яйца, 4…16% глицерина, или же лактозо(11%) — желточно(20%) — глицериновую(4…16%) среду. Сперму замораживают в ампулах объемом 1 мл, соломинках (пайеттах) объемом 0,5…1 мл или гранулах; в парах жидкого азота или на блоках твердого диоксида углерода (-79 °C) и хранят в жидком азоте (-196 °C).

  • Страницы:
    1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11